蚯蚓凍幹機的纖溶酶凍幹粉的方法

　　蚯蚓凍幹機在藥材凍幹機製備蚯蚓纖溶酶凍幹粉的方法！真空冷凍幹燥技術簡稱凍幹技術，是一項對食品護色、保鮮、保質的高新加工技術。目前廣泛用於果蔬、肉禽、水產、調味品、方便食品及名優特產等幹燥，可達到保持食品原有的色、香、味、形、新鮮度不變的目的，且複水性特好，成品便於貯存和運輸，費用降低，保存期延長。在幹燥蜂皇漿、人參、龜、鱉、蚯蚓等營養保健品，采用真空冷凍幹燥工藝，更使人們相信該營養品純真自然。
 

　　真空凍幹機製備蚯蚓纖溶酶凍幹粉的方法，其特征在於，包括如下步驟：
 

　　步驟一、蚯蚓粗粉的製備：將活蚯蚓，饑餓一天，自然吐淨泥沙，洗滌，而後在溫度介於2035℃的通風條件幹燥並製成粉碎，通過100200目篩製成蚯蚓粗粉；
 

　　步驟二、粗酶溶液的製備：取蚯蚓粗粉用2倍體積的0.1mol/L，pH為7.8的磷酸緩衝液PBS勻漿，加0.1mol/LNaCl溶液，置於4℃冰箱內過夜，然後以10000r/min，4℃離心15min，棄沉澱，取上清；上清液於50℃水浴保溫40min，流水冷卻，再8000r/min，4℃離心10min，取上清，在上清液中加硫酸銨達30%飽和度，靜置3小時，再8000r/min，4℃離心10min；收集上清液再加硫酸銨達70%飽和度，靜置3小時，再8000r/min，4℃離心10min，收集沉澱；將沉澱溶於上述緩衝液中，對上述緩衝液以載留5KD分子量的透析袋透析過夜去鹽，再將透析液8000r/min，4℃離心10min，取上清液即為蚯蚓纖溶酶粗酶溶液；
 

　　步驟三、粗酶的純化：將蚯蚓纖溶酶粗酶溶液過Sephadex G75凝膠層析，上柱前預先用0.02mol/L，pH為7.8的磷酸緩衝液平衡，上柱後用上述緩衝液洗脫至在280nm波長無光吸收，洗脫液出現2個蛋白峰，其中酶活性峰與第1個蛋白峰重疊，收集重疊部分的酶液，過DEAECellulose A52離子交換柱，過柱前先用0.05mol/L，pH為7.8的PBS平衡；然後用含00.5mol/L NaCl的PBS離子強度線性梯度洗脫，洗脫液出現3個蛋白峰，酶活性峰與蛋白峰第3峰重疊，其餘2個蛋白峰基本無酶活性，收集活性部分即為蚯蚓纖溶酶純酶；
 

　　步驟四、蚯蚓纖溶酶的修飾：加入蚯蚓纖溶酶純酶和活化的PEG到15mL，pH9.2，0.1mol/L的硼酸緩衝液中，純酶與PEG的重量比是1:50，在30℃下，保溫反應1小時，反應物對0.1mol/L，pH7.3的磷酸緩衝液透析過夜，透析液再以10000r/min，4℃離心l0min， 取上清液過柱Sephadex G75，收集活性成分，即為蚯蚓纖溶酶修飾酶；
 

　　步驟五、蚯蚓纖溶酶凍幹粉的製備：將蚯蚓纖溶酶修飾酶裝在樣品盤裏，料厚不超過8mm，放進真空冷凍幹燥機設備幹燥室內進行凍幹，於-35℃冷凍12小時，然後在5pa的真空度下，升溫至30℃，幹燥12小時；繼續升溫至40℃，真空幹燥14小時，得到蚯蚓纖溶酶修飾酶的凍幹粉，其含水量為7.0%，蛋白含量為68%，酶活力為1700U/mg。