凍幹機適用於(yu) 大多數細菌、放線菌、病毒、噬菌體(ti) 、立克次體(ti) 、黴菌和酵母等的真空冷凍幹燥保藏,但不適於(yu) 黴菌的菌絲(si) 型、菇類、藻類和原蟲等。其操作流程如下:
1、安瓿管準備
安瓿管材料以中性玻璃為(wei) 宜。清洗安瓿管時,先用2%鹽酸浸泡過夜,自來水衝(chong) 洗幹淨後,用蒸餾水浸泡至pH中性,幹燥後、貼上標簽,標上菌號及時間,加入脫脂棉塞後,121℃下高壓滅菌15-20分鍾,備用。
2、保護劑的選擇和準備
保護劑種類要根據微生物類別選擇。配製保護劑時,應注意其濃度及pH值,以及滅菌方法。如血清,可用過濾滅菌;牛奶要先脫脂,用離心方法去除上層油脂,一般在100℃間歇煮沸2-3次,每次10-30分鍾,備用。
3、凍幹樣品的準備
在zui適宜的培養(yang) 條件下將細胞培養(yang) 至靜止期或成熟期,進行純度檢查後(參見科技部自然科技資源平台聯合管理辦公室文件《微生物菌種純度檢測技術規程》(試行)),與(yu) 保護劑混合均勻,分裝。微生物培養(yang) 物濃度以細胞或孢子不少於(yu) 108-1010個(ge) /ml為(wei) 宜(以大腸杆菌為(wei) 例,為(wei) 了取得每毫升1010個(ge) 活細胞菌液2毫升-2.5毫升,隻需10毫升瓊脂斜麵兩(liang) 支)。采用較長的毛細滴管,直接滴入安瓿管底部,注意不要濺汙上部管壁,每管分裝量約0.1-0.2毫升,若是球形安瓿管,裝量為(wei) 半個(ge) 球部。若是液體(ti) 培養(yang) 的微生物,應離心去除培養(yang) 基,然後將培養(yang) 物與(yu) 保護劑混勻,再分裝於(yu) 安瓿管中。分裝安瓿管時間盡量要短,在1-2小時內(nei) 分裝完畢並預凍。分裝時應注意在無菌條件下操作。
4、預凍
一般預凍2小時以上,溫度達到-20℃到-35℃左右。
5、冷凍幹燥
采用冷凍幹燥機進行冷凍幹燥。將冷凍後的樣品安瓿管置於(yu) 冷凍幹燥機的幹燥箱內(nei) ,開始冷凍幹燥,時間一般為(wei) 8-20小時。
終止幹燥時間應根據下列情況判斷:
—— 安瓿管內(nei) 凍幹物呈酥塊狀或鬆散片狀
—— 真空度接近空載時的zui高值
—— 樣品溫度與(yu) 管外溫度接近
—— 選用1-2支對照管,其水份與(yu) 菌懸液同量,視為(wei) 幹燥完結
—— 選用一個(ge) 安瓿管,裝1-2%氯化鈷,如變深蘭(lan) 色,可視為(wei) 幹燥完結
冷凍幹燥完畢後,取出樣品安瓿管置於(yu) 幹燥器內(nei) ,備用。
6、真空封口及真空檢驗
將安瓿管頸部用強火焰拉細,然後采用真空泵抽真空,在真空條件下將安瓿管頸部加熱熔封。
熔封後的幹燥管可采用高頻電火花真空測定儀(yi) 測定真空度。
7、保藏
安瓿管應低溫避光保藏。
8、質量檢查
冷凍幹燥後抽取若幹支安瓿管進行各項指標檢查,如存活率、生產(chan) 能力、形態變異、雜菌汙染等。
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